INTRODUÇÃO: O bacilo Mycobacterium tuberculosis (Mtb) é responsável por causar a tuberculose (TB), uma das maiores causas de morbimortalidade do mundo, que em 2023, ultrapassando a COVID-19, voltou a ser a principal causa de morte por um único agente infeccioso1. O desenvolvimento de técnicas de diagnóstico molecular, apresentam-se como uma alternativa promissora para a detecção do Mtb, como a PCR em tempo real (qPCR)2,3. Sabe-se que o desempenho da qPCR depende diretamente do método de extração de DNA escolhido, que deve ser rápido, metodologicamente simples e capaz de garantir boa quantidade e qualidade do DNA4. OBJETIVO: O presente estudo teve como objetivo avaliar e comparar o desempenho de três protocolos in house de extração de DNA de Mtb: Mini Salting Out (MSO), Fenol-Clorofórmio (FC) e Brometo de Cetiltrimetilamônio (CTAB).