A leishmaniose visceral (LV) é uma doença zoonótica que tem como agente etiológico nas Américas o protozoário da espécie Leishmania infantum e no velho mundo, a espécie leishmania donovani, cujo diagnóstico precoce é fundamental para reduzir complicações e mortalidade. Nesse contexto, a PCR quantitativa em tempo real (qPCR) tem se destacado como uma ferramenta molecular de elevada acurácia para detecção do parasito. O presente estudo teve como objetivo avaliar o desempenho da qPCR no diagnóstico da LV humana e canina, por meio de uma revisão sistemática da literatura. As buscas foram realizadas nas bases PubMed, Embase e Scopus, abrangendo publicações em língua inglesa entre 2021 e 2026. Após aplicação dos critérios de exclusão, onze estudos foram incluídos na síntese qualitativa. Os resultados demonstraram ampla utilização de amostras de sangue, medula óssea e pele, além da avaliação de métodos menos invasivos, como swabs e microbiopsias. Os estudos incluídos sugerem que o kDNA tende a apresentar maior sensibilidade diagnóstica, enquanto os alvos 18S rDNA e ITS1 apresentaram elevado equilíbrio entre sensibilidade e especificidade. Os valores de sensibilidade variaram entre 81,8% e 100%, sendo que a maioria dos estudos reportou desempenho superior a 90%. Além disso, tecnologias emergentes, como PCR digital e plataformas lab-on-chip, demonstraram potencial para ampliar a aplicabilidade do diagnóstico molecular. Conclui-se que a qPCR apresenta elevado desempenho diagnóstico para leishmaniose, constituindo uma ferramenta promissora para diagnóstico, monitoramento terapêutico e vigilância epidemiológica.