O Parvovírus Humano B19 (B19V) é um patógeno comum cuja infecção pode levar a uma variedade de condições clínicas, desde uma doença exantemática autolimitada benigna, semelhante a outras patologias humanas, até a morte fetal. O B19V foi considerado responsável por infecções em adultos e crianças com sintomas indistinguíveis da dengue e de outros arbovírus. Para detectar o B19V em amostras de pacientes de Itacoatiara, Manacapuru e Tefé, cidades do estado do Amazonas, Brasil, coletamos 589 amostras de soro entre janeiro de 2013 e março de 2018, de pacientes com síndrome febril aguda. Inicialmente, os pacientes foram testados para malária e dengue, as amostras negativas foram testadas para DNA de B19V por nested-PCR. 32 amostras (31,6%) foram PCR positivas, 16 amostras (15,8%) apresentaram anticorpos IgM B19V, em 8 amostras foram detectados anticorpos IgM e DNA de B19V simultaneamente. Os pacientes referiram febre, cefaleia, dor óssea, dor ocular e mialgia como os sintomas mais frequentes. Estudos recentes consideram o B19V a causa da febre misteriosa em adultos brasileiros com sintomas semelhantes aos da dengue, portanto, nossos resultados sugerem que a detecção do B19V deve ser considerada como um diagnóstico diferencial em pacientes adultos com doença febril aguda.